Treść książki
Przejdź do opcji czytnikaPrzejdź do nawigacjiPrzejdź do informacjiPrzejdź do stopki
C4.Badanieliczbydrobnoustrojów
31
Wielekomórekprokariotycznychniejestzdolnychdowzrostunapłytkachagarowych.
Wtakimprzypadkuprocesrozcieńczaniasłużącyotrzymaniukulturyczystejprzepro-
wadzasięwpłynnymbulionie.Sterylnąpipetąpobierasięjedenmililitrwyjściowej
hodowlipłynnejidodajesiędo9mlnowegosterylnegopodłoża(dziesięciokrotne
rozcieńczenie,zapisywanejako10
-1
).Rozcieńczenie10
-1
jestdokładniemieszane,po
czymzostaniezniegopobrany1mlidodanydo9mlnowegosterylnegopodłoża
(stukrotnerozcieńczenie,zapisywanejako10
-2
).Procespowtarzanyjestjeszcze10lub
12razy,anastępnierozcieńczeniazostająpoddaneinkubacji.Największerozcieńczenia
niewykażążadnegowzrostu,apodłożewinnychstaniesięmętne.Wzrostobserwo-
wanywnajwiększymrozcieńczeniubędzieprawdopodobniewynikieminokulacji
mniejniż10komórkami.Gdytakiproceswykonamyjednocześniewdziesięciupowtó-
rzeniach,toostateczniemożetodoprowadzićdootrzymaniaczystejkultury,bowiem
wzrostw3-4powtórzeniachna10,jednegozrozcieńczeń,będziewynikałzpierwotnej
obecnościjednejkomórki.Takisposóbmożeteżzostaćwykorzystanydookreślenia
liczbybakteriiwmetodzienajbardziejprawdopodobnejliczby(MPN;zob.niżej).
Analizaliczbyprokariotów
Wmikrobiologiiważneczęstojestpoznanieliczbykomórekprzypadającychnamililitr
próbki.Możemybyćprawiepewni,żewpobranejpróbceznajdziemywielegatunków
prokariotów,wtymten,któregoposzukujemy,bylebypróbkabyławystarczającoduża
izostałapobranazsiedliska,któresprzyjawzrostowidanegoorganizmu.Jestpraw-
dopodobne,żewjajkachznajdziemybakterieSalmonella,alepytaniebrzmi„Czyjajka
tesązdatnedospożycia?”
.Abytakbyło,wilościjajekzjadanychnasurowomusiznaj-
dowaćsiętakaliczbaSalmonella,któraniespowodujezatrucia.LiczbakomórekSalmo-
nella,którewywołajązatruciepokarmowe,wynosiok.40,możemywięczałożyć,że
jeślijajamająbyćbezpieczne,naichtuzinpowinnoprzypadaćmniejniż40komórek
Salmonella.Takielimitysąpodstawąstandardówstosowanychwprzemyślespożyw-
czym-widzimywięc,żeszacowanieliczbybakteriijestkluczowąpraktykąwtejgałęzi
gospodarki.WmedycyniewystępowaniejednejlubdwóchkomórekStaphylococcus
aureusna10cmkwadratowychskóryczłowiekauważasięzasytuacjęnormalną,
aleobecność10
4
komóreknamm
2
możebyćjużprzyczynąpoważnychproblemów
dermatologicznych.Wmikrobiologiiśrodowiskowejwzględneliczbyorganizmów
wmililitrzepróbkiwodyzrzekimogąwskazywać,któregatunkisąwtymśrodowisku
dominujące.
Liczbęprokariotówwpróbcemożnawyrazićnadwasposoby:jakoichliczbęłączną
ijakoliczbękomórekżywych.Tapierwszamiaraodnosisiędoliczbykomórek
żywychimartwych,tadrugazaśtylkodotychkomórek,któresązdolnedowzrostu
wanalizowanychwarunkach.Dookreślanialiczbycałkowitejsłużyrozcieńczanie
próbkiwustalonejilościbuforuinastępnieliczeniekomórekzapomocąhemo-
cytometru.Hemocytometrtospecjalneszkiełkomikroskopowe(iprzykrywająceje
szkiełkonakrywkowe),dziękiktóremupodmikroskopemwidzimy„kratki”okreś-
lonejwielkości(będącedefactostudzienkamioznanejobjętości).Znającliczbę
